人胰腺癌細胞(PC3)
細胞培養(yǎng)步驟：
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1.準備F-12K培養(yǎng)基（F-12K : GIBCO);北美胎牛血清，10%; PS 1%。
2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
1. 復蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
 
人胰腺癌細胞(PC3)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3.細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
 
下面T25瓶為例；
細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 
注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 
細胞特性：
1)來源：胰腺癌
2)形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人胰腺癌細胞(PC3)運輸和保存：使用T25瓶充液發(fā)送活細胞。收到細胞后，請先在顯微鏡下檢查細胞生長狀態(tài)，并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后，再次檢查細胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，可進行細胞后續(xù)處理操作，按照以下方式進行。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物，請及時與我們取得電聯(lián)。

細胞用途：僅供使用。